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新生兒采血卡廠家講解乙醇沉淀純化法
對于乙醇沉淀純化法,新生兒采血卡廠家講解如下:實驗室臺式離心機,通過首先確保溶液中存在正確濃度的正離子來沉淀DNA(過多會導致大量鹽與DNA共沉淀,過少會導致DNA不完全恢復),然后加入2-3個體積的DNA至少95%的乙醇。許多方案建議此時在低溫下儲存DNA,但也有人認為它可能無法改善DNA回收率,甚至可能在使用過夜培養(yǎng)時間時降低沉淀效率。因此,在室溫下可以實現良好的效率,但是當考慮到可能的降解時,最好在濕冰上孵育DNA。最佳孵育時間取決于DNA的長度和濃度。較小的碎片和較低的濃度將需要更長的時間才能實現可接受的恢復。對于非常小的長度和低濃度,建議進行過夜孵育。在這種情況下,使用載體如tRNA ,糖原或線性聚丙烯酰胺可以大大提高恢復。
在孵育期間,DNA和一些鹽將從溶液中沉淀出來,在下一步驟中,通過在微量離心管中以高速(~12,000g)離心收集該沉淀物。 離心的時間和速度對DNA回收率的影響最大。再次,較小的片段和較高的稀釋度需要更長和更快的離心。離心可以在室溫或4℃或0℃下進行。在離心過程中,沉淀的DNA必須通過乙醇溶液移動到管的底部,較低的溫度增加溶液的粘度,較大的體積使距離更長,因此這兩個因素都降低了該過程的效率,需要更長的離心以獲得相同的效果。離心后,除去上清液,留下粗DNA 沉淀 。顆粒是否可見取決于DNA的量和純度(更容易看到更臟的顆粒)或使用共沉淀劑。
在下一步中,將70%乙醇加入到顆粒中,輕輕混合以使顆粒松散并洗滌。這樣可以去除殘留上清液中的一些鹽,并與DNA沉淀結合,使最終的DNA更清潔。將該懸浮液再次離心,再次沉淀DNA,除去上清液。該步驟重復一次。
最后,將沉淀空氣干燥,并將DNA重懸于水或其它所需緩沖液中。重要的是不要使顆粒過度干燥,因為它可能導致DNA 變性并使其難以重懸。
異丙醇也可用于代替乙醇; 異丙醇的沉淀效率更高,使得一個體積足以沉淀。然而,異丙醇的揮發(fā)性低于乙醇,并且在最后一步中需要更多的時間進行風干。當使用異丙醇時,顆粒也可能不太緊密地粘附在管上。